常德市疾病预防控制中心于2009年率先成为我省首批国家流感网络实验室，流感病毒细胞培养水平位居全省前列，为了进一步提高实验室病毒培养能力，获得更加珍贵的疫苗毒株，我中心于近期开展了流感病毒鸡胚培养，并获得了4株鸡胚毒株，是全省少数成功开展流感病毒鸡胚培养的地州市之一，也是我市首次培养出流感病毒鸡胚毒株。

鸡胚是正处于发育的机体，组织分化程度低，细胞代谢旺盛，适于许多人类和动物病毒的生长繁殖，鸡胚培养技术较细胞培养技术难度相对增加，技术含量更高，但培养的病毒浓度高，纯度大，适合做疫苗研制和其它进一步的研究，鸡胚的培养技术比较繁琐，需要经历：孵卵→检卵→接种病毒→收获病毒→鉴定病毒等五个程序，完成全套操作约需15天时间。

 经过一个多月的前期准备工作，3月18日，我们开始实验的第一步：孵卵，也叫鸡胚孵育，鸡胚孵育成活是整个实验成功的关键。孵育前的鸡卵先用清水洗净，再用干布擦干，放入孵卵器内进行孵育，孵育三日后，鸡卵每日翻动1—2次。孵至第4日，用检卵灯观察鸡胚发育情况，未受精卵，只见模糊的卵黄黑影，不见鸡胚的形迹，这种鸡卵被淘汰。活胚可看到清晰的血管和鸡胚的暗影，比较大一些的可以看见胚动，随后每日观察一次，将胚动呆滞或没有运动、血管昏暗模糊者，即可能已死或将死的鸡胚，要随时加以淘汰。生长良好的蛋胚一直孵育到接种前，具体胚龄视所拟培养的病毒种类和接种途径而定。

3月28日，我们开始下一步实验：检卵和接种。将孵育好的鸡胚圆头朝下，倾斜45°倒扣于检卵灯圆孔上，转动鸡胚，观察亮黑点（眼睛）位置并标记，标记气室位置，在黑点正上方气室部分划一垂直直线，此为接种线，在蛋壳上用铅笔标记标本编号，接着采用双腔接种法进行盲种，顺着接种线，注入流感样病例的咽拭子标本0.5ml，拔出一半，再注入0.5 ml，蜡封口，放入温箱培养3天左右。

3月31日，我们开始收获并鉴定病毒。首先将接种标本的鸡胚取出，在4℃冰箱过夜，将鸡胚冻死而使血液凝固，第二天，从冰箱取出冻死的鸡胚，用酒精消毒气室部位卵壳，以无菌镊子击破气室端卵壳，沿气室周围剪去卵壳，撕去壳膜和绒毛尿囊膜，用镊子轻轻压住胚胎，以无菌吸管吸取尿囊液于灭菌试管内。后将吸管插入羊膜腔内收集鸡胚羊水，约可收到1ml病毒样液体。最后再对收获的病毒样液体进行鉴定，通过血凝和血凝抑制实验，最终鉴定出4株A型流感病毒鸡胚毒株。

流感病毒鸡胚培养成功标志着我市的流感监测水平又迈上了一个新的台阶，我们会以此为契机，在流感高发季节，继续开展鸡胚培养，力争在2016年内培养出15株流感病毒鸡胚毒株，进一步提高实验室的检测能力，为今后重大传染病的监测和预警打下坚实的基础。同时，我们也衷心地感谢湖南省疾病预防控制中心的专家和同仁对我们这次鸡胚培养工作的精心指导和大力支持。